利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记在抗体上的显色物质 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来检测组织细胞内抗原,对其进行定位、定性及定量的研究的技术,称为免疫组织化学。
免疫组织化学已问世超过半个世纪,随着各种标记技术的不断创新和染色方法的不断完善、新抗体的层出不穷、以及自动化技术的整合应用,免疫组化技术亦得到不断的更新发展,展现出更高的检测灵敏度、更好的特异性、更广泛的检测指标,检测方法的条件控制也更趋标准化。免疫组化技术已成为蛋白表达模式的科学研究和临床病理辅助诊断最为重要的技术之一。
抗原(antigen)是一类能刺激机体的免疫系统使之产生特异性免疫应答,并能与相应的免疫应答产物在体内或体外发生特异性结合的物质。
抗原具有两种特性:
(1)免疫原性(immunogenicity):抗原能刺激特定的免疫细胞,使免疫细胞活化、增殖、分化,最终产生免疫效应物质(抗体和致敏淋巴细胞)的特性。
(2)免疫反应性(immunoreactivity):抗原与相应的免疫效应物质(抗体和致敏淋巴细胞)在体内或体外相遇时,可发生特异性结合而产生免疫反应的特性。
抗原决定簇 /抗原表位是存在于抗原分子表面,决定抗原特异性的特殊化学基团,一般由5~8个氨基酸残基、短寡糖残基、核苷酸残基组成。抗原决定簇是被免疫细胞和抗体分子识别的标志,是免疫反应具有特异性的物质基础。
机体受到抗原刺激后,由B淋巴细胞转化的浆细胞合成并分泌的一类具有与抗原发生特异性结合的球蛋白,称为抗体(Antibody)。抗体都是免疫球蛋白,但免疫球蛋白并不一定都是抗体。免疫组化实验中常用的抗体主要是单克隆抗体和多克隆抗体。
单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,是在使用抗原免疫动物后,分离B淋巴细胞,应用细胞融合杂交瘤技术制备出杂交瘤细胞,在杂交瘤细胞培养上清中获得。另外基因工程重组技术亦可制备单克隆抗体。
多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
一个抗原上可以有好几个不同的抗原决定簇,在抗原刺激机体后,B淋巴细胞可以针对抗原上不同的抗原决定簇,使机体产生相对应的几种不同的抗体。最终产生出抗体是浆细胞(B细胞激活后转化成浆细胞)。
只针对一个抗原决定簇起作用的浆细胞群就是一个纯系,纯系的英文为Clone,音译就是克隆。由一种细胞克隆产生的特异性抗体就叫做单克隆抗体(只可以识别抗原上的某一抗原决定簇)。好几种单克隆抗体的混合物(可识别同一抗原上的多个不同的抗原决定簇),则称为多克隆抗体。单克隆抗体由于只识别抗原上的某一特定抗原决定簇,因此其特异性高于多克隆抗体!